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前腔静脉血检测在非瘟疫苗毒早期发现与确诊中的应用

2023-06-26 08:50:19   来源:曲博士猪群健康管理    点击:
作者简介:刘博洋  华南农业大学兽医学硕士,博维特兽医咨询顾问助理,曾接受博维特兽医体系的系统培训,对各种非洲猪瘟疫情的紧急处置、蓝耳病防控及PEDV处置等具备丰富的经验。

经过过去5年的探索,很多猪场已经掌握了非洲猪瘟野毒的发病特点、检测途径与处置方法等,但ASFV经过2-3年的本土化适应后,临床案例的非洲猪瘟病毒毒株与临床表现呈现多元化,疫苗毒与自然弱毒感染对于绝大部分猪群而言都可能是灾难性后果,其根本原因是在于如何对发病猪进行早期发现?

本次比较了不同样品(口咽拭子、尾根血及前腔静脉血)、不同检测方法(抗原PCR及抗体ELISA)对于疫苗毒早期发现中的应用,希望对中国养猪同行的弱毒防控有帮助。

一、非瘟自然弱毒株和疫苗毒的临床特点
1、非瘟疫苗毒或自然弱毒感染初期临床症状均不明显,感染后不易及时发现;
2、猪群感染后存在间歇性排毒现象,通过PCR检测的检出率低,存在漏检情况;
3、在很多失败的疫苗毒或弱毒感染案例中,确诊感染时,病毒已经在猪群中多点、甚至跨栋舍传播,使非瘟防控形势更加复杂
4、临床症状严重性依次为:基因Ⅱ型野毒>基因Ⅰ型苗毒>基因Ⅱ型单基因缺失苗毒(或野毒变异)>基因Ⅱ型双基因缺失苗毒(或野毒变异)
5、可按照“早、快、严、小”的原则快速对阳性猪群进行处置,最大限度的减少疫苗毒扩散,减少经济损失。
二、苗毒感染案例临床背景
某猪场在某月中旬检出第一例阳性猪,随后对阳性样品进行分型鉴定,鉴定结果为双基因缺失疫苗毒。按照阳性区域栏位清除,通槽猪清除,前后各通槽猪清除,之后对阳性区域及其他区域猪群异常猪咽拭子采样检测和栏位环境每周采样评估,但抗原持续监测结果为阴性,且持续半个月。但通过采集前腔静脉血、尾根血检测评估猪群感染情况,出现多头阳性猪只,并按照栋舍清群。

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图1:阳性样品分型结果

三、前腔静脉血抗原检测在双缺疫苗毒的应用

三种不同样品类型检测数据对比。样品信息:前腔静脉血样品为连续2天以上临床存在异常的猪,合计75头,尾根血、咽拭子为异常猪检测样品,尾根血、咽拭子样品已包含在前腔静脉血样品内。下图展示为前腔静脉血阳性样品及尾根血、咽拭子样品部分数据信息。

1、在检出率对比上:前腔静脉血20%>尾根血4%>咽拭子样品1.3%,表明前腔静脉血在双缺疫苗毒的检出率要远高于尾根血、咽拭子。

2、数据分析时发现,咽拭子采样存在连续多天未检出,现场查看咽拭子采样为饲养员采样,存在采样不到位的情况,因此派兽医严格按照咽拭子、尾根血采样标准对阳性猪进行采样。检出率咽拭子与尾根血检出率都为6%,表明咽拭子、尾根血采样方式在检出率上差异小,但与前腔静脉血检出率相差较大。

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\3、进一步分析双缺疫苗毒临床症状。共统计15头阳性猪临床症状。临床症状表现为:少食(6头)、不食(4头)、精神沉郁(1头)、呕吐(1头)、少食+耳朵紫斑(1头)、关节炎(2头)。特别注意在阳性猪临床症状中存在吃料正常但精神沉郁、关节炎腿疼、呕吐的猪,这些临床症状也是需要重点排查的异常猪。
\四、前腔静脉血清抗体检测在疫苗毒的应用
1、将抗体检测与抗原检测结合可评估猪群感染时间。根据L. Mur的研究表明基因Ⅱ型非洲猪瘟病毒在感染家猪后11天抗体转阳,存在感染21天后抗体转阳猪只。因此非瘟病毒抗体的产生可能在11-21天。在毒力更弱的基因Ⅱ型非洲猪瘟病毒存在感染更长时间才产生抗体的案例。

2、猪群感染后存在间歇性排毒现象,而抗原的消减大概需要30天时间,也就是临床所表述的耐过猪(无临床症状猪)或是潜在和真正的病毒携带者。

3、通过对这批阳性样品进行了抗体检测,判断临床感染时间及可能产生的交叉风险点。检测结果显示有2头猪抗原阳性,抗体阴性,根据栏位分析,10-111与10-112、9-107与9-110是临近栏位,可能感染时间不长(黄色标记)。同时出现抗原阴性、抗体阳性猪只(红色标记),猪只感染可能发生在1个月以前,表明1个月前猪群已经感染了非瘟,而第一次检出阳性在15天以前,因此决定按栋舍清群,并对其他栋舍采集前腔静脉血评估非瘟感染情况,进一步制定剔除方案。

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五、总结
1、对于非瘟疫苗毒感染检测,检出率前腔静脉血>尾根血与咽拭子。

2、咽拭子采样存在采样不到位、交叉污染风险大等不足之处,需对采样人员进行严格的培训和考核评估,达到采样标准后上岗。特殊时期成立专业采样队伍,保证采样结果的准确性。

3、非瘟疫苗毒感染的临床症状中出现吃料正常但精神沉郁、腿疼、耳朵紫斑等症状,要特别注意有这些临床症状的猪只可能已潜在感染,同时负责紧急处置的兽医需要对异常猪类型进行重点培训。

4、非瘟疫苗毒抗体检测结果表明,疫苗毒潜伏期长,感染初期临床症状表现不明显。非瘟抗体阳性表示感染时间至少在11天以上。若出现抗原阴性、抗体阳性猪只可能感染时间发生在30天之前。

六、结论

1、在非瘟感染初期,检出阳性样品后第一时间确定毒株类型。前腔静脉血检测抗原抗体可评估非瘟感染时间,辅助确定紧急处置方案。

2、双缺疫苗毒发病下,尾根血和咽拭子检出率均显著降低,单纯依靠实验室检测很难做到精准剔除,要结合临床症状少食、不食猪只进行大力度清除,甚至清栋舍、清群。

3、前腔静脉血采血存在交叉污染大、采血操作动作大、猪只应激大等诸多缺点,只能作为感染疫苗毒时的辅助采样方案,选择性使用。


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