感染ASFV基因缺失株后不同部位的排毒监测结果

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2022-03-31 14:11:33 来源：曲博士猪群健康管理点击：

自2020年开始，在不同的省份均有ASFV弱毒株感染案例，其中弱毒包括自然变异的弱毒株（CD2v变异）、基因单缺失弱毒株、基因双缺失弱毒株等。从临床症状上看，弱毒株的致病性弱于2018年~2019年的野毒株，隐匿性更强，不同弱毒株的临床症状严重程度也各异。在某些临床案例中，单一的尾根血采样或口咽部采样不能检测到病毒，排毒呈一定的跳跃性或偶发性，尤其是基因缺失毒株感染的案例，从而错过了疾病早发现、早处置的窗口期。

为了掌握弱毒株感染后病毒对外排毒的规律，对某临床自然感染中最早表现临床症状（剩料）的“1号”猪进行55天的持续采样监测，每天采集口腔拭子、鼻拭子、肛拭子、阴户血拭子和尾根血拭子，并分开单独检测，以确认不同部位样品的排毒差异性，确认最佳采样途径。

现将监测结果整理如下，希望对临床早期发现与紧急处置的采样提供一定的参考。

一、检测结果

临床背景：发病猪群为群养，发病初期，发现某病猪精神不佳，采食量下降，随即采样进行分子生物学确诊，并进行基因缺失的状态判断。

将首次检测阳性的那一天定义为第1天。确认发病后，持续54天对某头病猪进行监测，每个部位的样品单独采集，单样检测。

1.“1号”猪持续排毒监测

2-9天是阳性率的高发期：确诊阳性后的第2-9天在口腔拭子、鼻拭子和肛拭子、尾根血拭子等部位共检测40份样品，检出阳性15份，阳性率为37.5%（15/40），其中7天可以检测出阳性；4天在不同部位同时检测出。说明：初期各部位都有排毒，但排毒具有一定的跳跃性。且确诊后前9天是检测的最佳窗口期。
在第10天-55天，共检测230次，检出阳性10次，检出率为4.3%（10/230），其中9天检测出阳性；1天在不同部位同时检测出。10-55天阳性率仅4.3%，较前9天的37.5%大幅度下降。说明呈现临床症状的第9天之后偶尔对外排毒，但却持续存在对外排毒的风险。

图1 不同时间不同采样部位的阳性检出率

2. 不同部位排毒检出率

在监测期的54天内不同样品发现阳性的次数分别是：口腔拭子6次、鼻拭子4次、肛拭子5、阴户拭子6次、尾根血拭子4次。综合各部位样品，该病猪被检测到阳性的次数为共16次。

由此可看出，各部位检出率相似，阴户血拭子阳性率稍高些。

3. 不同部位CT值

各部位的平均CT值，口腔拭子36.93，鼻拭子39.6，肛拭子37.37，阴户血拭子34.61，尾根血拭子35.2。综合所有样品平均CT值为36.61。

可以看出血液中检测的CT值较其他样品低2-5个CT值。血拭子在敏感性方面占一定的优势。

二、讨论与提示

病毒鉴定：猪场发生疫情时，一旦检测阳性，应第一时间鉴别毒株类型，尤其是临床症状不典型时。对于缺失毒株，还应该进行ELISA抗体的检测，以进行综合判断。
排毒窗口期：弱毒株的最佳检测时间是临床症状表现异常的前10天。但有些其他案例中，有临床症状后，可能连续5天以上检测结果呈阴性，但猪只其实已经感染，只是检测结果暂时阴性。
不同部位样品结合：为了确诊弱毒株感染猪群，同时采集猪只口、鼻、肛、阴阴户和尾根血拭子，可以提高异常猪的检出率。但不同部位采样，可能造成交叉污染与内部生物安全的风险。
实验室检测能力提升：弱毒株感染猪只不同部位的样品，口腔拭子和尾根血等CT值较以往的野毒株高，通常检测CT值都在30-40之间，若实验室检测能力差，很容易错过早期发现窗口期。故为了应对可能的弱毒株感染的风险，兽医检测实验室都应努力提升实验室的检测能力与敏感性，使用高灵敏性的试剂盒和检测机器，不断提升实验室人员的检测操作的熟练程度，其次保证重复性和准确性。博维特所下属的兽医诊断实验室维特康检测技术团队正向行业输出实验室检测能力确认、检测技术培训及检测敏感性评估系列的服务。
多种检测手段的结合：排毒是跳跃性的，这点对于后备母猪引种时的健康评估有一定的指导意义，应该增加采样量，使用PCR与ELISA结合的检测方式，这点对于规避可能的弱毒株感染非常关键。PCR检测可以采集环境样品、猪群唾液样品等。ELISA检测的试剂盒选择至关重要，笔者对多种ASFV ELISA试剂盒做过评估，假阳性是普遍的挑战。

稿：曲向阳